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            GT115感受態

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            GT115:                                                      100μl/支
            pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl
            保存條件(保質期):                            -80℃(6個月) 

             
            基因型
            FmcrA∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) f80lacZDM15∆lacX74 recA1 rpsL (StrR) endA1 ∆dcm uidA(DMluI)::pir-116∆sbcC-sbcD

             
            產品說明
            GT115菌株,是專門用來克隆含有發夾結構(Hairpin)或重復序列等DNA二級結構的基因序列的大腸桿菌菌株。大腸桿菌中存在一種SbcCD蛋白復合體,可以識別DNA發夾結構,并將其切除;將sbcCsbcD兩個基因突變,增強了發夾結構DNA的穩定性。同時在大腸桿菌基因組中引入uidA(DMluI)::pir-116,使GT115可以表達 兀 蛋白,含有R6Kg ori復制子的質粒( pCpG-mcs、pCpG-LacZ、pCpG-siRNA …)可以正常復制。該菌株還含有具有核酸酶 (endA)突變、重組酶 (recA)突變,增強了外源DNA的穩定性。GT115感受態細胞經特殊工藝制作,pUC19檢測轉化效率>2×10cfu/μg DNA。

             

            操作方法
            1. GT115感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質;蜻B接產物)并用手撥打EP管底混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。
            2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。
            3. 向離心管中加入0.9 mL室溫S.O.C.或LB培養基(S.O.C.營養豐富,可提高轉化效率)。
            4. 37℃,225 rpm復蘇60分鐘。
            5. 5000 rpm離心1分鐘收菌,留取100 μl左右上清吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的S.O.C. 或LB培養基上。
            6. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。
             
            注意事項
            1. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率;烊肽康腄NA時應輕柔操作。轉化高濃度的質;蚋咝实倪B接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。
            2. 此菌株具有鏈霉素抗性,擁有這種抗性的質粒無法使用。


             

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