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            EPI400感受態

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            EPI400:                                                          100μl/支
            pUC19 (control vector,10pg/μl):                      10μl
            保存條件(保質期):                          -80℃(6個月)

            基因型
            F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ- rpsL(StrR) nupG trfA tonA pcnB4 dhfr

             
            產品說明
            EPI400來源于EC100菌株,將EC100核基因中控制質?截悢档pcnB基因刪除后引入一個誘導啟動子驅動的pcnB基因,即是EPI100菌株。EPI400菌株可以降低質粒的拷貝數,特別適合于各種不穩定DNA或毒性基因的克隆,在加入WDEPI-誘導劑 I 后又可以提高質粒產量到正常狀態。[mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型使EPI400菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA 。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。lacZΔM15 標記的存在使EPI400可用于藍白斑篩選,tonA賦予其抗噬菌體T1和T5的能力,rpsL賦予其鏈霉素抗性。EPI400感受態細胞經特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率可達5×10cfu/μg DNA。

             
            操作方法
            1. EPI400感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質;蜻B接產物)并用手撥打EP管底混勻,冰中靜置25分鐘。
            2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。
            3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。
            4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。
            5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養至少15 h。

            注意事項
            1. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中10分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。


             

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