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            S17-1 λpir感受態

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            S17-1 λpir:                                                 100μl/支

            pUC19 (control vector,10pg/μl):                     10μl

            保存條件(保質期):                             -80℃(6個月) 


             

            基因型

            RP4-2(Km::Tn7,Tc::Mu-1), pro-82, LAMpir, recA1, endA1, thiE1, hsdR17, creC510 


            產品說明

            S17-1 λpir菌株的染色體中整合了RP4-2質粒,該質?梢詳y帶染色體的部分DNA在接合菌株之間轉移。 S17- 1 λpir菌株缺失核酸內切酶 (endA1),提高了質粒DNA的產量和質量;同時為重組酶缺陷型 (recA1),減少插入片段的同源重組概率,保證了插入DNA 的穩定性。Tn7賦予該菌株弱的鏈霉素抗性。唯地生物生產的S17-1 λpir感受態細胞經特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率>1×108 cfu/μg DNA。

             

             


             


             

            操作方法

            1. S17-1 λpir感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質;蜻B接產物)并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

            2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。

            3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。

            4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的LB培養基上。

            5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養(12-15 h)。

             


             


             

            注意事項

            1. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。

            2. 轉化高濃度的質;蚋咝实倪B接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。

             


             


             

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