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            DH5α λpir感受態

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            DH5α λpir:                                              100μl/支
            pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl
            保存條件(保質期):                            -80℃(6個月) 

             
            基因型
            F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) LAMpir U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA

             

             
            產品說明
            DH5α λpir菌株來源于DH5α,在DH5α大腸桿菌基因組中引入LAMpir,即為DH5α λpir,該菌株可以表達 PIR蛋白,使得含有R6Kg ori復制子的質?梢栽谄渲姓椭。 DH5α λpir菌株缺失核酸內切酶 (endA),提高了質粒DNA的產量和質量;重組酶缺陷型 (recA)減少插入片段的同源重組概率,保證了插入DNA 的穩定性;lacZΔM15的存在使DH5α可用于藍、白斑篩選;但DH5α λpir菌株生長速度較慢,在平板培養或液體搖菌時應延長生長時間。唯地生物開發的DH5α λpir感受態細胞經特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率>1×10cfu/μg DNA。

             

            操作方法
            1. DH5α λpir感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質;蜻B接產物)并用手撥打EP管底混勻,冰中靜置25分鐘。
            2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。
            3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇70分鐘。
            4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的LB培養基上。
            5. 將平板倒置放于37℃培養箱至少18小時。

             
             
            注意事項
            1. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。
            2. DH5α λpir菌株生長緩慢,在平板上培養或液體搖菌時應延長菌體生長時間(37℃,18小時以上)。
            3. 轉化高濃度的質;蚋咝实倪B接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。


             

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