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            JM330感受態

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            JM330:                                                     100μl/支
            pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl
            保存條件(保質期):                            -80℃(6個月)

             

             
            基因型

            F- φ80 lacZ∆M15 ∆(lacZYA-argF)U169 recA1 endA1 hsdR17(rk-, mk+) phoA supE44 λ-thi-1 gyrA96 relA1 tonA

            產品說明
            JM330菌株(即DH5α T1 Phage Resistant),來源于DH5α菌株。在DH5α大腸桿菌基因組中引入tonA,賦予其抗噬菌體T1,T5的能力,即為JM330。JM330菌株最大的特點是其可以在體內特異性降解甲基化質粒模板,廣泛應用于各種DNA定點突變試驗中。JM330菌株缺失核酸內切酶 (endA1)和重組酶(recA1),提高了質粒DNA的產量和質量; lacZΔM15的存在使JM330可用于藍、白斑篩選。唯地生物開發的JM330感受態細胞經特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率>1×109cfu/μg DNA。

             

             
            操作方法
            1. JM330感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(例如:Dpn I消化產物等)并用手撥打EP管底混勻,冰中靜置25分鐘。
            2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。
            3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇70分鐘。
            4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體,留取50 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的LB培養基上。
            5. 將平板倒置放于37℃培養箱至少15小時。

             

            注意事項
            1. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。
            2. JM330可以對未被Dpn I降 解掉的質粒模板進行進一步的降解,因此可以保證定點突變具有更高的陽性率。
            3. 轉化高濃度的質;駾pn I消化產物可相應減少最終用于涂板的菌量。
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