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            MG1655感受態

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            MG1655:                                                    100μl/支
            pUC19 (control vector,10pg/μl):                     10μl
            保存條件(保質期):                             -80℃(6個月)

            基因型

            K12 F- lambda- ilvG- rfb-50 rph-1

            產品說明
            MG1655菌株來源于W1485,是K12的衍生菌株,是一種經過較少改造,比較接近于“WT-野生型”的大腸桿菌工程菌株。MG1655外觀形態標準,同時可做為擴增大腸桿菌WT型基因的模板使用,也可作為蛋白表達的宿主菌株使用,但不含核酸酶endA1突變,體內核酸酶含量較高,提取質粒時務必使用質粒提取試劑盒中去蛋白液盡量去除核酸酶,以防提取的質粒被降解。pUC19質粒檢測轉化效率>0.5×10cfu/μg DNA。

             
            操作方法
            1. MG1655感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質;蜻B接產物)并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。
            2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。
            3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。
            4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。
            5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養至少15 h。

            注意事項
            1. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。
            2. 轉化高濃度的質;蚋咝实倪B接產物可相應減少最終用于涂板的菌量
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