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            EPI300感受態

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            EPI300:                                                         100μl/支
            pUC19 (control vector,10pg/μl):                     10μl
            保存條件(保質期):                         -80℃(6個月)

            基因型
            F – mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ∆M15 ∆lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆(ara,leu)7697 galgalK λ –rpsnupG trfdhfr.

             

             
            產品說明
            EPI300細胞含有一個突變的trfA基因,該基因表達出的蛋白產物可以促進含有ori V復制子的質粒的高拷貝擴繁,誘導劑Ⅰ可以誘導trfA基因的表達。當含有ori V復制子質粒的EPI300細胞在LB/2YT或SOB培養基中生長時,trfA基因的表達被抑制,ori V復制子質粒的拷貝數維持在很低的水平;當在培養基中加入誘導劑Ⅰ,ori V復制子質粒的拷貝數可維持在很高的水平,提高了質粒產量。因此EPI300菌株可以降低ori V復制子質粒的拷貝數,特別適合于各種不穩定 DNA 或毒性基因的克隆。 [mrr-hsdRMS-mcrBC]基因型使EPI300菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA(例如:哺乳動物基因組DNA)。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。lacZΔM15 標記的存在使EPI300可用于藍白斑篩選,rpsL賦予其鏈霉素抗性。EPI300感受態細胞經特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率可達3×108cfu/μg DNA。

             

             
            操作方法
            1. EPI300感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質;蜻B接產物)并用手撥打EP管底混勻,冰中靜置25分鐘。
            2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。
            3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。
            4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或
                LB培養基上。
            5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養至少15 h。

             

             
            注意事項
            1. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。
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